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文章轉(zhuǎn)載自：中國皮膚性病醫(yī)學雜志

作者：秦鷗，王學民，談益妹，江文才

［摘要］目的探討受到微弱損傷的皮膚致敏后，發(fā)生變應(yīng)性接觸性皮炎的幾率及對皮膚的影響。方法采用十二烷基磺酸鈉敷貼，膠帶粘貼及紫外線照射三種方式對皮膚進行微弱損傷并用芳香混合物Ⅰ致敏，通過臨床評估，非創(chuàng)儀器TewameterTM210，Corneometer CM820，ChromameterCＲ400和實驗室檢查評價皮膚表面狀況，檢測皮膚經(jīng)表皮失水率、含水量、顏色和炎癥及致敏情況。結(jié)果進行微弱損傷后，臨床評估為0分，但十二烷基磺酸鈉和膠帶粘貼部位經(jīng)表皮失水率顯著高于微損傷前，十二烷基磺酸鈉部位含水量顯著低于微損傷前(P＜0.05)。致敏后，十二烷基磺酸鈉和膠帶粘貼部位的臨床評分、經(jīng)表皮失水率和a*值均比未受過微損傷的致敏部位顯著升高(P＜0.05);IL-1α和IL-12的含量較致敏前顯著升高(P＜0.05)。以上差異均有統(tǒng)計學意義。結(jié)論及早發(fā)現(xiàn)皮膚屏障受到的微弱損傷，能及時阻斷無臨床癥狀的皮膚向臨床疾病方向發(fā)展，預(yù)防接觸性皮炎的產(chǎn)生和發(fā)展。

［關(guān)鍵詞］表皮屏障；微弱損傷；接觸致敏

皮膚是防止外來有害物質(zhì)進入機體的第一道防線，其最主要的生理功能是皮膚屏障功能。屏障功能的有效發(fā)揮依賴于角質(zhì)層結(jié)構(gòu)的完整和功能的正常，其結(jié)構(gòu)主要由角質(zhì)細胞、細胞間脂質(zhì)和皮膚附屬器三部分組成。若角質(zhì)層結(jié)構(gòu)受損或功能發(fā)生異常改變，屏障功能將被破壞，對物質(zhì)滲透吸收增加，經(jīng)表皮失水率(transepidermalwaterloss，TEWL)升高。受損的皮膚屏障有利于變應(yīng)原滲透，透皮吸收增加又促進表皮的炎癥改變，因此，若受損的皮膚接觸抗原，會導(dǎo)致變應(yīng)性接觸性皮炎(allergiccontactdermatitis，ACD)的發(fā)生閾值降低，皮膚發(fā)生致敏的機會增加，上述觀點已得到皮膚科領(lǐng)域的認可。實際生活中，皮膚更易受到輕微損傷，但由于不會導(dǎo)致皮膚產(chǎn)生明顯炎癥，易被忽視。相對于屏障功能完整的皮膚，受到微損傷的皮膚接觸變應(yīng)原后ACD的發(fā)生率是否增加，將是本次研究的目的。

1材料和方法

1. 1對象具有芳香混合物Ⅰ(fragancemixⅠ，F(xiàn)MⅠ)過敏史的志愿者37名，最終完成試驗33名，其中男6名，女27名，年齡30～59歲，平均(43.42±7.39)歲。所有志愿者無活動性皮膚病，無全身系統(tǒng)性疾病，無光過敏史，1個月內(nèi)未使用抗組胺藥、抗炎藥或免疫抑制劑，未接受任何免疫治療，未同時參加其他臨床試驗;所有志愿者均了解研究過程并簽署知情同意書。

1. 2儀器Tewameter(TewameterTM210，Courage+Khazaka，Cologne，Germany)用于檢測TEWL;Corne-ometer(CorneometerCM820，Courage+Khazaka，Co-logne，Germany)用于檢測皮膚表皮含水量(CAP);Chromameter(CＲ-400，MinoltaCameraCo.Ltd.，Osa-ka，Japan)運用L*a*b*顏色系統(tǒng)檢測皮膚顏色。儀器檢測前，志愿者用清水清洗雙前臂，在18℃～22℃、相對濕度40%～60%的環(huán)境中靜坐30min。

1. 3方法選取志愿者前臂屈側(cè)9個部位，每個部位為50px×50px大小，按照表1進行隨機處理。

第一階段(刺激)第1～3天，2個部位進行十二烷基磺酸鈉(SLS)敷貼，將1%SLS溶液30μL滴在50px×50px的濾紙上，置于皮膚表面，待濾紙干后取下;2個部位進行膠帶粘貼(TS)，Tape(ScotchMagicTape，810ESp，19mm×25mm，MinnesotaMining＆Mfg，USA)，每個部位粘貼15次，每次粘貼時間、壓力和撕去膠帶的速度及方向均保持一致;2個部位使用上海希格瑪高技術(shù)有限公司生產(chǎn)的紫外線模擬儀SolarSimula-torSUV-1000進行紫外線照射(UV)，照射劑量為0.8個最小紅斑量(MED);其余3個部位不做處理;每次

處理前進行臨床評估和非創(chuàng)儀器檢測。

第二階段(致敏)第4～8天，第4天進行臨床評估和非創(chuàng)儀器檢測后抽取外周靜脈血8mL，按照隨機表對不同部位進行FMⅠ斑貼(PT)，斑試器采用芬蘭小室(Epitest，Tuusula，F(xiàn)inland);第6天(PT48h)，去除斑試器半小時后進行臨床評估、非創(chuàng)儀器檢測和抽取外周靜脈血8mL;第8天進行臨床評估和非創(chuàng)儀器檢測。

刺激階段臨床評分標準采用日本接觸性皮炎學會的刺激性接觸性皮炎評分標準:0為沒有反應(yīng)，1為非常弱/輕微的紅斑，2為弱至中等紅斑，3為清晰的紅斑，4為紅斑、丘疹或有水腫，5為紅斑、水皰，6為腐蝕性反應(yīng)(大皰、壞死)。致敏階段采用國際接觸性皮炎研究小組的變態(tài)反應(yīng)斑貼試驗評分標準:0(－)為陰性反應(yīng);1(±)為可疑反應(yīng)，隱約可見的紅斑;2(+)為弱陽性反應(yīng)，紅斑，浸潤，可有丘疹;3(2+)為強陽性反應(yīng)，紅斑，浸潤，丘疹，水皰;4(3+)為極強陽性反應(yīng)，明顯紅斑和浸潤，融合性水皰;IＲ為刺激反應(yīng)，NT為未試驗。

1.4實驗室檢測抽取外周靜脈血，室溫凝固60min，離心1000r/min共15min，收集血清，應(yīng)用IL-1α和IL-12ELISA試劑盒進行細胞因子測定。

1.5統(tǒng)計學處理采用SPSS18(Systatversion18;Chicago，IL，USA)軟件進行統(tǒng)計分析。計量資料的兩兩比較采用配對t檢驗及兩相關(guān)樣本的非參數(shù)檢驗，檢驗水平P＜0.05。

2結(jié)果

2. 1刺激階段見表2。經(jīng)過連續(xù)3天弱刺激，33名志愿者所有部位臨床評分為0。非創(chuàng)儀器檢測結(jié)果顯示，SLS和TS部位TEWL值顯著高于基礎(chǔ)值，差異有統(tǒng)計學意義(tSLS=－3.991，PSLS=0.001;tTS=－5.435，PTS=0.000);SLS部位CAP顯著低于基礎(chǔ)值，差異有統(tǒng)計學意義(t=2.403，P=0.026);TS部位CAP值升高，但與基礎(chǔ)值差異無統(tǒng)計學意義(t=－0.728，P=0.475);所有部位a*值與基礎(chǔ)值差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。2.2致敏階段

2.2.1臨床評分見表3。去除FMⅠ斑貼后0.5h(第6天)及48h(第8天)，SLSPT，TSPT，UVPT及PT部位的臨床評分均顯著升高，與NONE及CONTＲOL部位差異有統(tǒng)計學意義(t6SLSPT-NONE=－3.342，t6TSPT-NONE=－3.225，t6UVPT-NONE=－2.873，t6PT-NONE=－2.555，t6SLSPT-CON=－3.330，t6TSPT-CON=－3.221，t6UVPT-CON=－2.844，t6PT-CON=－2.539，t8SLSPT-NONE=－3.078，t8TSPT-NONE=－2.699，t8UVPT-NONE=－2.214，t8PT-NONE=－2.207，t8SLSPT-CON=－3.078，t8TSPT-CON=－2.699，t8UVPT-CON=－2.214，t8PT-CON=－2.207;P均＜0．05);SLSPT較PT部位、TSPT較PT部位臨床評分顯著升高，差異有統(tǒng)計學意義(t6SLSPT-PT=－2.455，t6TSPT-PT=－2.266，t8SLSPT-PT=－2.580，t8TSPT-PT=－2.047;P均＜0.05);UVPT比PT部位臨床評分高，但差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。

2.2.2經(jīng)表皮失水率(TEWL)見圖1。第6天及第8天，SLSPT，TSPT，UVPT及PT部位的TEWL值均比NONE部位顯著升高，差異有統(tǒng)計學意義(t6SLSPT-NONE=－8.341，t6TSPT-NONE=－9.294，t6UVPT-NONE=－7.283，t6PT-NONE=－3.943，t8SLSPT-NONE=－5.510，t8TSPT-NONE=－4.532，t8UVPT-NONE=－2.766，t8PT-NONE=－2.133;P均＜0．05);第6天CONTＲOL部位的TEWL值比NONE部位顯著升高，差異有統(tǒng)計學意義(t=－3.338，P=0.003);第6天TSPT較PT部位的TEWL值顯著升高，差異有統(tǒng)計學意義(t=2.404，P=0.026);第8天SLSPT和TSPT部位均比PT及CONTＲOL部位的TEWL值顯著升高，差異有統(tǒng)計學意義(t8SLSPT-PT=3.684，t8TSPT-PT=2.849，t8SLSPT-CON=4.394，t8TSPT-CON=3.527;P均＜0．05);第6天和第8天UVPT與PT部位的TEWL值差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。

2.2.3皮膚表皮含水量(CAP)見圖2。第6天，SL-SPT，TSPT，UVPT及PT部位的CAP均比NONE部位顯著升高，差異有統(tǒng)計學意義(t6SLSPT-NONE=－2.996，t6TSPT-NONE=－2.317，t6UVPT-NONE=－2.282，t6PT-NONE=－3.021;P均＜0．05);CONTＲOL較NONE部位升高，差異有統(tǒng)計學意義(t=－1.912，P=0.07);第8天各部位間差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。

2.2.4皮膚顏色變化(a*值)見圖3。第6天及第8天，SLSPT，TSPT，UVPT及PT部位的a*值均比NONE部位顯著升高，差異有統(tǒng)計學意義(t6SLSPT-NONE=－8.347，t6TSPT-NONE=－9.513，t6UVPT-NONE=－5.367，t6PT-NONE=－4.545，t8SLSPT-NONE

=－6.186，t8TSPT-NONE=－6.767，t8UVPT-NONE=－5.367，t8PT-NONE=－4.338;P均＜0．05);第6天SLSPT及TSPT較PT部位的a*值顯著升高，差異有統(tǒng)計學意義(t6SLSPT-PT=－3.109，P6SLSPT-PT=0.005;t6TSPT-PT=－4.545，P6TSPT-PT=0.000)。

2.3實驗室檢測結(jié)果見表4。致敏后IL-1α和IL-12含量均較致敏前顯著升高，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。

3討論

本研究通過建立受到累積性微弱刺激而未出現(xiàn)臨床表現(xiàn)的皮膚模型，使其致敏產(chǎn)生ACD，根據(jù)臨床評分、非創(chuàng)儀器檢測結(jié)果和實驗室檢查結(jié)果來探討不同狀態(tài)皮膚屏障對接觸致敏的影響。研究選取三種刺激方式:SLS，TS和UV，分別代表化學、物理和紫外線這三類日常生活中常見的損傷。第一階段的刺激方式和濃度劑量，在連續(xù)3天累積損傷后，均不足以導(dǎo)致皮膚產(chǎn)生臨床癥狀。致敏階段選取FMⅠ為抗原，一方面由于FMⅠ是一種全球范圍內(nèi)常見且致敏率較高的抗原，選擇FMⅠ具有現(xiàn)實意義;另一方面FMⅠ不會導(dǎo)致皮膚產(chǎn)生強烈的ACD，也不易產(chǎn)生刺激性接觸性皮炎(ICD)，故既能保證研究過程中志愿者的安全，又能排除其他干擾因素，保證研究順利進行。

在評判ACD嚴重程度的方法中，臨床評分是應(yīng)用廣泛、準確性較高的方法，且經(jīng)驗豐富的皮膚科醫(yī)生能鑒別大部分的ICD和ACD，準確率達到70%。但由于視覺局限性和臨床癥狀相似，在臨床和科研工作中，常需借助更敏感、客觀的手段方法來幫助診斷和鑒別，本研究采用了各種非創(chuàng)儀器和實驗室檢查。第一階段，經(jīng)過3天累積性刺激后，皮膚處于亞臨床狀態(tài)，臨床評分為0，非創(chuàng)儀器檢測結(jié)果顯示SLS和TS部位TEWL值顯著升高，SLS部位CAP值顯著降低，說明皮膚屏障功能受損，表皮含水量下降，但由于未產(chǎn)生臨床癥狀，臨床上不能進行診斷。SLS作為典型的化學刺激物，具有強滲透性和刺激性，影響角質(zhì)層脂質(zhì)和蛋白質(zhì)合成進而破壞皮膚屏障功能，同時造成表皮含水量下降。TS也是評價皮膚屏障的經(jīng)典方法，膠帶粘貼不僅減少角質(zhì)層的角質(zhì)細胞和細胞間脂質(zhì)，還使角質(zhì)層變薄，進一步加劇對皮膚屏障的機械性損傷。經(jīng)過3天的TS，上層表皮被粘去，CM825檢測到的為較深層次的表皮細胞，這些細胞間連接更為緊密，含水量高于淺層表皮，故CAP值升高。

由于本研究志愿者均有FMⅠ致敏史，在第二階段致敏后，僅有一名志愿者所有部位的臨床評分均為0分，其余志愿者SLSPTS，TSPT，UVPT和PT部位的臨床評分均比致敏前顯著升高。第6天及第8天SLSPT和TSPT部位的臨床評分均高于PT部位，提示雖然刺激階段不能使皮膚產(chǎn)生明顯的臨床癥狀，但接觸致敏物后，已發(fā)生微弱損傷的部位致敏程度更強，且可與健康狀態(tài)下產(chǎn)生致敏的皮膚產(chǎn)生明顯差異。

在非創(chuàng)儀器的檢測中，TEWL的變化趨勢和臨床評估基本一致，經(jīng)過微損傷并致敏的部位TEWL值顯著高于未經(jīng)損傷的部位，說明SLS和TS刺激對皮膚屏障造成的影響增加了致敏的機會。CONTＲOL部位在去除斑貼后0.5hTEWL明顯升高，48h回到基礎(chǔ)值，提示濾紙斑貼會對皮膚造成短暫性封閉影響。第6天由于受到斑試器封閉作用和變態(tài)反應(yīng)造成的角質(zhì)細胞內(nèi)及細胞間水腫的影響，斑貼部位含水量較斑貼前顯著升高，第8天封閉作用消失，CAP快速下降，回到基線。由于TSPT部位角質(zhì)層厚度較薄，維持水分的固有成分減少，保持水分能力減弱，第8天時含水量下降最為明顯。

致敏后各斑貼部位a*值均升高，SLSPT和TSPT部位升高最明顯，與PT部位差異有統(tǒng)計學意義，說明第一階段的刺激增加了致敏后皮膚發(fā)生炎癥反應(yīng)的程度。CONTＲOL部位a*值無明顯變化，說明濾紙的封閉作用不會造成皮膚產(chǎn)生炎癥變化。本研究中可能由于UV在刺激階段造成的損傷較弱，故在致敏階段不能通過臨床評判和非創(chuàng)儀器的檢測分辨出差異。

IL-1α是反映炎癥反應(yīng)程度的細胞因子，值越高說明皮膚炎癥反應(yīng)程度越重;IL-12是反映變態(tài)反應(yīng)程度的細胞因子，值越高說明ACD反應(yīng)越強。致敏后IL-1α和IL-12均顯著升高，證明皮膚炎癥反應(yīng)程度增強，且產(chǎn)生了致敏反應(yīng)。

基于以上研究證明，受到微弱損傷的皮膚接觸變應(yīng)原后，ACD產(chǎn)生的幾率和程度較正常皮膚增加。為了及早發(fā)現(xiàn)皮膚屏障受到的微弱損傷，及時阻斷無臨床癥狀的皮膚向臨床疾病方向發(fā)展，預(yù)防接觸性皮炎的產(chǎn)生和發(fā)展，研究職業(yè)性皮膚病和環(huán)境性皮膚病的預(yù)防措施，筆者致力于早期發(fā)現(xiàn)屏障功能受到的微損傷，對皮膚屏障進行敏感的檢測和正確的評判。

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