［摘要］銀屑病是一種多基因遺傳性基礎(chǔ)上免疫介導(dǎo)的、慢性復(fù)發(fā)性炎癥性皮膚病。點(diǎn)滴狀銀屑病屬于尋常性銀屑病之一，該型銀屑病的臨床表現(xiàn)以紅斑、丘疹、鱗屑表現(xiàn)為主。玫瑰糠疹病因不清，有學(xué)者認(rèn)為與人類皰疹病毒 6 型(HHV-6)與人類皰疹病毒 7 型(HHV7)感染有關(guān)，也是一種紅斑丘疹鱗屑性皮膚病。點(diǎn)滴狀銀屑病與玫瑰糠疹二者都好發(fā)于軀干部位，肉眼看來有很多相似之處。典型的點(diǎn)滴狀銀屑病與玫瑰糠疹是容易鑒別的，前者有刮臘現(xiàn)象、薄膜現(xiàn)象與點(diǎn)狀出血等特征，后者皮疹的長(zhǎng)軸與皮紋方向一致，且部分玫瑰糠疹可以有子母斑等進(jìn)行鑒別。但不典型的點(diǎn)滴狀銀屑病與不典型的玫瑰糠疹，二者靠肉眼鑒別有一定困難，此時(shí)做皮膚組織病理檢查是有價(jià)值的鑒別診斷方法。但皮膚組織病理檢查是一種有創(chuàng)傷取材方法，患者依從型差。我們根據(jù)點(diǎn)滴狀銀屑病與玫瑰糠疹二者皮疹表層的細(xì)胞學(xué)種類不同，用透明膠帶粘貼皮疹區(qū)表層脫落細(xì)胞的無創(chuàng)性取材方法鑒別這兩種疾病，實(shí)驗(yàn)結(jié)果滿意。
［關(guān)鍵詞］銀屑病、飲食、病毒、疾病
1. 1 研究對(duì)象 均為 2015 年 9 月 － 2016 年 12 月至本院皮膚科就診的患者，對(duì)臨床表現(xiàn)不典型的銀屑病患者及和玫瑰糠疹患者皮損進(jìn)行組織病理學(xué)檢查，均簽署知情同意書。選擇組織病理診斷為點(diǎn)滴狀銀屑病與玫瑰糠疹的患者各 30 例，其中銀屑病組患者中男 18 例，女 12 例，年齡 39. 50 ± 21. 55;玫瑰糠疹組患者中男 14 例，女 16 例，年齡 32. 33 ± 23. 75。兩組患者的性別構(gòu)成比和年齡均具有可比性。
1. 2 試劑和材料 HE 染液，一抗為鼠抗人粒細(xì)胞髓過氧化物酶抗體，二抗為辣根過氧化物酶標(biāo)記的兔抗鼠 Ig G 多克隆抗體，二氨基聯(lián)苯胺(DAB)為底物顯色試劑盒，均購自美國 Bio Genex公司。EAF 固定液配置:取冰醋酸 5mL，40% 甲醛 10mL，無水乙醇加至 100mL。
1. 3 方法
1. 3. 1 標(biāo)本采集 兩組患者均予市售透明膠帶粘貼于皮疹部位，3s 后揭下棄去(去除表面干燥脫落細(xì)胞)，然后同法在相同部位分別粘貼 3 條膠帶取材，供實(shí)驗(yàn)用。帶有標(biāo)本的膠帶做HE 染色( 去除最初 2 步二甲苯脫蠟步驟) 及免疫組織化學(xué)染色，并進(jìn)行組織細(xì)胞學(xué)檢查。每位患者再進(jìn)行脫落細(xì)胞取材的同時(shí)，將兩組患者的非透明膠帶粘貼皮疹區(qū)選擇一處做皮膚組織病理檢查，進(jìn)行 HE 染色。
1. 3. 2 標(biāo)本 HE 染色 有脫落細(xì)胞標(biāo)本的膠帶固定于載玻片上，粘有細(xì)胞一面朝上制作標(biāo)本和標(biāo)記。取其中一張標(biāo)本用95% 酒精固定，改良 HE 染色，即宮頸表皮細(xì)胞染色方法，脫水透明，中性樹膠封片后，光鏡下觀察。
1. 3. 3 免疫組織化學(xué)染色 取剩余兩張標(biāo)本用 EAF 固定液在
4℃ 下固定 15min，PBS 沖洗，按試劑盒說明書進(jìn)行操作。其中
一張標(biāo)本作為空白對(duì)照，另外一張標(biāo)本做 DAB 顯色和 HE 復(fù)
染，各 40s。染色和脫水，中性樹脂封片，用于光鏡下觀察。
1. 3. 4 皮損標(biāo)本 HE 染色 見組織病理操作規(guī)程。
1. 4 診斷標(biāo)準(zhǔn) 膠帶標(biāo)本 HE 染色結(jié)果中，光學(xué)顯微鏡下細(xì)胞核形態(tài)來判斷細(xì)胞類型，將細(xì)胞核呈現(xiàn)分葉或桿狀判定為中性粒細(xì)胞，而圓形或近圓形核為皮膚鱗狀細(xì)胞，即相當(dāng)于皮膚組織病理 HE 染色法的角質(zhì)層角化不全細(xì)胞或顆粒層細(xì)胞。同時(shí)觀察中性細(xì)胞分布狀態(tài)，即分散或聚集分布。顯微鏡下出現(xiàn)群集狀分布的中性粒細(xì)胞為陽性，診斷為銀屑病;未見中性粒細(xì)胞或者出現(xiàn)少量散在分布的中性粒細(xì)胞為陰性，診斷為玫瑰糠疹。脫落細(xì)胞法檢測(cè)若見中性細(xì)胞群聚分布，則判為陽性結(jié)果，診斷為點(diǎn)滴狀銀屑病;若非群集分布診斷( 中性細(xì)胞分散分布 + 無中性細(xì)胞)則判為陰性結(jié)果，診斷為玫瑰糠疹。透明膠帶法診斷銀屑病的診斷率(% ) = a/(a + b)，玫瑰糠疹診斷率(% ) = d/(c + d)，總診斷準(zhǔn)確率(% ) = ( a + d) /( a + b+ c + d) 。
1. 5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 用 SPSS13. 0 軟件，比較透明膠帶法診斷結(jié)果與組織病理 HE 染色法診斷結(jié)果的符合率及中性粒細(xì)胞在兩組患者中分布情況采用 χ2檢驗(yàn)，P ＜ 0. 05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2. 1 透明膠帶 HE 染色結(jié)果 兩組患者皮損的中性細(xì)胞分布情況見表 1，脫落細(xì)胞法診斷率與組織病理法診斷情況比較結(jié)果見表 2，兩組患者的中性細(xì)胞群集發(fā)生率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2= 52. 50，P ＜ 0. 01 ) 。透明膠帶粘貼正常皮膚、點(diǎn)滴狀銀屑病皮疹、玫瑰糠疹皮疹，進(jìn)行 HE 染色后，顯微鏡下脫落細(xì)胞分布情況見圖 1 ～ 3。
2. 2 免疫組織化學(xué)染色結(jié)果 點(diǎn)滴狀銀屑病組患者標(biāo)本中粒細(xì)胞髓過氧化物酶單抗染色陽性區(qū)域有群集細(xì)胞核為分葉狀和桿狀者，進(jìn)一步證實(shí)此類細(xì)胞是中性粒細(xì)胞，因?yàn)橹行粤＜?xì)
胞含有髓過氧化物酶(圖 4)。
2. 3 診斷符合率比較 見表 2。透明膠帶細(xì)胞法對(duì)點(diǎn)滴狀銀屑病和玫瑰糠疹的診斷符合率分別為 93. 33% 和 100. 00% ，總診斷準(zhǔn)確率為 96. 67% 。
透明膠帶取材法從皮疹區(qū)粘取毛囊蠕形螨、疥螨、淺部真菌等已經(jīng)應(yīng)用多年。但應(yīng)用透明膠帶粘貼皮疹脫落細(xì)胞用于研究皮膚病的診斷問題，在國內(nèi)外文獻(xiàn)中罕有報(bào)告。近年來，
國內(nèi)學(xué)者陳向明等率先研究用透明膠帶粘貼皮疹區(qū)的表皮脫落細(xì)胞，鑒別不典型斑塊狀銀屑病與不典型錢幣狀濕疹，在小樣本內(nèi)取得了滿意結(jié)果。本研究采用皮疹區(qū)脫落細(xì)胞法鑒
別不典型的點(diǎn)滴狀銀屑病與不典型玫瑰糠疹。我們知道，無論進(jìn)展期銀屑病還是靜止期銀屑病，乃至各型別銀屑病皮損最關(guān)鍵特異的組織病理特征是在角質(zhì)層的角化不全上部有中性粒
細(xì)胞聚集即 Muro 微膿腫，在點(diǎn)滴狀銀屑病 Muro 微膿腫可以呈駝峰樣。Muro 微膿腫的發(fā)生機(jī)制與 IL-8引起的中性粒細(xì)胞趨化密切相關(guān)。Muro 微膿腫這個(gè)獨(dú)特的組織病理特點(diǎn)為利用透明膠帶粘貼皮疹表層脫落細(xì)胞法診斷銀屑病提供了理論及實(shí)驗(yàn)依據(jù)。而玫瑰糠疹組織病理的表皮層有灶性角化不全，通常沒有Munro 微膿腫形成，我們?cè)诮M織病理診斷為玫瑰糠疹患者的透明膠帶脫落細(xì)胞方法中也印證了這一點(diǎn)。
將組織病理診斷為點(diǎn)滴狀銀屑病及玫瑰糠疹者作為兩種疾病診斷的金標(biāo)準(zhǔn)(即診斷率為 100. 00% )。本透明膠帶脫落細(xì)胞診斷法分別與其比較，結(jié)果銀屑病的診斷率為 93. 33%
(28 /30)，玫瑰糠疹的診斷率為 100. 00% (30 /30)，總準(zhǔn)確率96. 67% 。表明該實(shí)驗(yàn)方法非常接近金標(biāo)診斷法，表明該研究有重要臨床應(yīng)用價(jià)值。
本研究通過免疫組化法證實(shí)這些簇集的桿狀核及分葉核細(xì)胞全部為中性粒細(xì)胞，表明 HE 染色法即可獨(dú)立用于中性粒細(xì)胞定性，這樣在臨床實(shí)際應(yīng)用中就不必做免疫組化染色，可以顯著降低檢驗(yàn)成本。關(guān)于2 例點(diǎn)滴狀銀屑病患者的中性粒細(xì)胞呈散在分布，其可能與粘貼膠帶偏離皮疹有關(guān)，沒有粘取到中性粒細(xì)胞群集區(qū)域所在的部位，或者與一次性取材恰好粘貼到角化不全層，而遺漏的下面的 Muro 微膿瘍層，所以建議在皮疹區(qū)連續(xù)粘貼 2 次，可能會(huì)提高陽性比例。在表皮角質(zhì)層中，中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)的疾病除銀屑病外，還有體癬、膿皮病、膿皰病、念珠菌病、脂溢性皮炎和梅毒等。但這些疾病在臨床表現(xiàn)及其他實(shí)驗(yàn)室檢查方面可以鑒別，不在本研究范圍內(nèi)。
本項(xiàng)透明膠帶粘貼皮疹表皮脫落細(xì)胞法的適用范圍是已經(jīng)排除其他類似皮膚病，僅僅在不典型點(diǎn)滴狀銀屑病與不典型玫瑰糠疹二者無法鑒別時(shí)使用。盡管透明膠帶脫落細(xì)胞診斷法不像皮膚組織病理那樣可以縱向地看到表皮、真皮及皮下組織病理情況，但該法具有操作簡(jiǎn)單、檢驗(yàn)成本低、患者依從性高等優(yōu)點(diǎn)，有進(jìn)一步研究與應(yīng)用價(jià)值。
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